一、背景

小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA KIT應用雙抗體夾心法測定標本中5核苷酸酶(5-NT)水平。

原理：用純化的5核苷酸酶(5-NT)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入5核苷酸酶(5-NT)，再與HRP標記的5核苷酸酶(5-NT)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5核苷酸酶(5-NT)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中5核苷酸酶(5-NT)濃度。

二、小鼠5核苷酸酶(5-NT)ELISA KIT操作步驟

1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2）根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

三、應用

用于血清5’-NT、TBA、GGT及ALT檢測在肝臟疾病中的臨床價值研究：

探討血清5’-核苷酸（5’-NT）、總膽汁酸（TBA）、γ,-谷氨?；D移酶（GGT）丙氨酸氨基轉移酶（ALT）的檢測在肝臟疾病中的臨床價值。

方法：采用美國貝克曼AU5821全自動生化分析儀,測定各肝病組和正常對照組血清5’-NT、TBA、GGT、ALT含量。結果：各組肝病患者5’-NT、TBA、GGT、ALT值均明顯高于正常對照組（P＜0.01）。5’-NT值在慢性病毒性肝炎組和肝硬化組、肝癌組的比較中,差異有統計學意義（P值均＜0.05）。TBA值在慢性病毒性肝炎組和肝硬化組、肝硬化組和肝癌組的比較中,差異有統計學意義（P值分別為＜0.05和＜0.01）。GGT值在慢性病毒性肝炎組和肝癌組、肝硬化組和肝癌組的比較中,差異有統計學意義（P值分別為＜0.01和＜0.05）。

ALT值在慢性病毒性肝炎組和肝硬化組、肝癌組的比較中,差異有統計學意義（P值均＜0.01）。

結論：ALT值不能完全反映患者的病情輕重,尤其不能反映肝組織病理學損傷情況,低水平的ALT值可看作是慢性病毒性肝炎并發肝硬化、肝癌的危險因素。5’-NT和GGT持續增高對于監測慢性病毒性肝炎并發肝硬化、肝癌具有一定的臨床價值。而對于慢性病毒性肝炎、肝硬化患者,GGT大幅增高時應警惕肝癌的發生。TBA可較為敏感的反映肝硬化患者的分泌、合成代謝功能。血清5’-NT、TBA、GGT可較為靈敏的反映肝細胞損傷及肝功能障礙程度,對于肝臟疾病的診斷及鑒別診斷、療效監測、預后判斷具有較高的臨床應用價值。